产品内容：
提取液：80mL×2 瓶，4℃保存；
试剂一：液体40mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 支，-20℃保存；溶于1mL丙酮，可分装后-20℃保存。临用前再用丙酮100倍稀释后使用。
试剂三：粉剂×1 支，-20℃保存；临用前加入2mL丙酮溶解备用。
试剂四：液体2.5mL×1 瓶，4℃保存； 
产品说明：
线粒体复合体Ⅱ又称琥珀酸-辅酶Q 还原酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，催化琥珀酸氧化生成延胡索酸，同时辅基FAD 还原为FADH2，后者进一步还原氧化型辅酶Q 生成还原型辅酶Q，是呼吸电子传递链的支路。
复合体Ⅱ的催化产物还原型辅酶Q 可进一步还原2,6-二氯吲哚酚，2,6-二氯吲哚酚在605nm 有特征吸收峰，通过检测2,6-二氯吲哚酚的减少速率来计算该酶活性。
试验中所需?仪器和试剂：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、丙酮、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、复合体Ⅱ的提取： 
(1) 称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1.0 mL提取液，用匀浆器或研钵于冰上匀浆。
(2) 4 ℃ 600 g离心10min。
(3) 将上清液移至另一离心管中，4 ℃ 11000 g离心15min。
(4) 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅱ（此步可选做，可以判断线粒体提取效果）。
(5) 在沉淀中加入400μL提取液，超声波破碎（功率20％，超声5秒，间隔10秒，重复15次），用于复合体Ⅱ酶活性测定，并且用于蛋白含量测定。
 
二、测定步骤：
1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至605nm，蒸馏水调零。
2. 样本测定
（1） 工作液的配制：临用前将试剂二和试剂三按1：1混合，现用现配；
（2） 将试剂一37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）预热15min；
（3） 在微量玻璃比色皿/96孔板中分别加入：
 
试剂名称
测定管
样本
10
试剂一
150
工作液
20
试剂四
20
将上述试剂分别加入比色皿/96孔板后迅速吹打混匀，记录第10s的吸光值A1，尽量在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）环境中准确反应2分钟，之后迅速取出记录2min时的吸光度A2，计算ΔA=A1-A2。
 
三、复合体Ⅱ活力单位的计算：  
（1） 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟消耗1 nmol 2，6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。

相关文献：
《A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum》 作者:Qiuli OuYang, Nengguo Tao* and Miaoling Zhang 期刊:Frontier in Immunology 影响因子:4.259 PMID:29503638